新冠OmicronBA.5株 假病毒(Luciferase)，新冠假病毒    

货号：SC2-BA5-PV

规格：200ul

滴度：20000TCID50～200000 TCID50

保存：干冰，-70℃以下保存一年以上，避免反复冻融

新冠病毒假病毒：

新冠病毒假病毒是将VSV病毒载体中的包膜糖蛋白用新冠病毒 S 蛋白替代，可形成模拟新冠病毒感染的假病毒。假病毒通过表面 S 蛋白感染靶细胞并表达报告荧光素酶基因。中和抗体可以阻断 S 蛋白和ACE2 的结合，从而阻止假病毒对宿主细胞的感染。通过检测报告基因荧光素酶的表达量，能推断出病毒被阻断的程度，从而进行中和剂的筛选或验证。因此假病毒在作为病毒核酸检测试剂盒验证阳性对照和标准品，中和抗体研究和疫苗开发，病毒受体研究中代替真病毒进行细胞水平检测的首选。

本产品带有嘌呤霉素的抗性基因，用于过表达细胞系筛选；核酸序列有Luciferase报告基因的序列，便于试验观察感染效率。

本产品为假病毒液体制剂，可以用稀释液直接稀释使用。

产品用途：

中和抗体筛选

构建模拟SARS-COV-2感染细胞/动物的研究模型

抗新冠药物筛选

滴度定义：

通过感染细胞检测荧光计算感染细胞数进行计算，1个荧光细胞=1活性病毒颗粒。

假病毒的定义：

假病毒（Pseudovirus）是一种重组病毒，为复制缺陷型病毒，即该病毒感染目的细胞后不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒，可以感染易感宿主细胞，只能在细胞内复制一轮。由于病毒表面蛋白在进入宿主细胞中起着关键作用，因此假病毒表面蛋白的构象结构与天然病毒蛋白具有高度相似性；然而，与野生型（WT）病毒相比，假病毒的毒力有所减弱，使它们能够在P2实验室中安全处理。

VSV病毒介绍：

水疱性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus，VSV）载体在研究病毒颗粒入侵宿主细胞、辨认介导病毒感染细胞的细胞表面受体、筛选抑制病毒药物以及疫苗开发方面有着广泛的应用。VSV病毒载体可以高效地利用非同源的病毒蛋白进行假型化（presudotypted），例如要求使用高生物安全等级的病毒包膜蛋白，因此VSV也是研究高风险病毒细胞侵入机制的理想选择。我公司开发了一系列先进的技术和试剂，大为改进了重组VSV包装的滴度、纯度、可靠性和稳定性，特别是结合了我们的VSV载体克隆系统。

新型冠状病毒：

新型冠状病毒（SARS-CoV-2）是一种正链RNA病毒，研究表明，SARS-CoV-2和SARS-CoV都利用血管紧张素转换酶2（ACE2）作为宿主细胞表面受体进入靶细胞。SARS-CoV-2基因组的前三分之二名为ORF1ab区，其余部分则编码几种辅助蛋白和四种结构蛋白，包括棘突（S，Spike Protein）糖蛋白、包膜（E，Envelope Protein）、基质（M，Membrane Protein）和核衣壳（N，Nucleocapsid Protein）蛋白，它们对维持包膜SARS-CoV-2病毒粒子的结构完整性很重要。

仅供研究使用

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假病毒使用方法

细胞准备：实验前一天，将待感染细胞接种于96孔细胞培养板中，接种量约为1x10⁴个细胞/孔，次日进行病毒感染时，细胞密度在40%左右为佳；

假病毒感染：取出冻存的假病毒置于常温水浴融化或2-8℃条件下自然融化，待其完全融化后，吸取所需量病毒（可设计浓度梯度）加入细胞培养体系中感染目的细胞。以HEK293T细胞为例，加入假病毒量2-20μL/孔，病毒感染后6-8H后更换新鲜培养基继续培养；

感染检测：细胞感染假病毒48-72H后,通过观察绿色荧光蛋白表达和检测荧光素酶的活性判定感染效率。

补充：假病毒对不同细胞的感染效率不同，正式实验前建议进行预实验，以确定最适病毒量。

建议的加样表

表1.六梯度样品加样顺序表

备注：CC：细胞对照；VC：假病毒对照

【注意事项】

1、假病毒为复制缺陷型病毒，即该病毒感染目的细胞后不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒。

2、实验操作需要在BSL-2实验室和ClassⅡ生物安全柜条件下进行，并穿戴好实验服、口罩和手套等个人防护用品。

3、如果实验时本品不慎溅出，请立即使用84消毒液对其进行灭活处理，如果溅到眼睛、皮肤或其他身体部位请立即使用大量清水冲洗。

4、使用本品所产生的实验废弃物需要通过高压灭菌处理后按照医疗废弃物处理要求进行处理。

5、冻融对假病毒活率有影响，尽量避免反复冻融。

6、在实验操作过程中需避免产生气泡。

7、本产品仅供研究使用/For Research Use Only。